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鼠李糖乳杆菌抗幽门螺杆菌感染的临床效果评价

作者:

关键词:

摘要：

幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori)感染是消化性胃溃疡、慢性胃炎甚至胃癌等多种消化道疾病的主要致病因素。全球范围内H.pylori的感染率超过50%，且发展中国家的感染率(70%～90%)远高于发达国家(25%～50%)[1-2]。目前，国内外主要采用三联和四联疗法作为H.pylori的治疗方案。但由于抗生素的广泛使用，H.pylori的耐药性、治疗过程中的不良反应、胃肠功能紊乱等问题一直存在[3-4]。因此，寻求非抗生素物质来治疗或辅助治疗H.pylori感染十分重要。研究显示，益生菌、生物活性蛋白、抗氧化剂、植物提取物等膳食成分具有完善或改进现有治疗方案的作用效果[5]。

诸多研究表明鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和罗伊氏乳杆菌等具有降低H.pylori感染的功效[6-8]。鼠李糖乳杆菌LGG可以体外抑制H.pylori生长，辅助三联治疗可以提高临床H.pylori的根除率[9]。本实验室前期从江苏省昆山市健康人粪便筛选到1株鼠李糖乳杆菌，其在体外模拟的胃液和肠液中处理后的存活率可以达到86.89%，且其抗生素抗性较低，是1株具有较好体外特性的潜力菌株。

本研究拟探究鼠李糖乳杆菌JS-SZ-2-1(鼠李糖乳杆菌CCFM1119)抗H.pylori感染的效果，首先通过其抑制H.pylori生长和黏附作用进行体外评价，再通过临床实验进一步探究其缓解患者H.pylori感染的作用效果，以期开发一种用于干预治疗H.pylori感染的食疗性乳杆菌。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 实验菌株和细胞株

LGG来源于美国模式培养物集存库(American Type Culture Collection，ATCC)，其他乳杆菌是从中国健康人粪便分离并保藏于江南大学食品生物技术中心菌种保藏库；受赠于南方医科大学陈烨教授团队；人胃腺癌细胞(human gastric adenocarcinoma cell line，AGS)购买自中国科学院上海细胞库。

1.1.2 主要试剂

哥伦比亚琼脂培养基，英国OXOID公司；脱纤维绵羊血，杭州新锐公司；F-12培养基、胎牛血清，美国Gibco公司；尿素，江苏博美达生命科学公司；苯酚红，国药集团化学试剂公司；人胃蛋白酶原(pepsinogen，PG)、IL-8、TNF-α ELISA试剂盒，南京福麦斯公司。

1.1.3 主要设备

PB300-N电子天平，上海Mettler Toledo公司；HWS-150恒温恒湿培养箱，上海一恒科技有限公司；i160三气培养箱，美国Thermo公司；MLS-3 750高压蒸汽灭菌锅，日本SANYO公司；BSC-1 000ⅡA2生物安全柜，苏州安泰空气技术有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 乳杆菌抑菌能力的测定

参考RYAN等[10]的方法。乳杆菌活化2代，菌悬液经0.22 μm无菌滤膜过滤，得到乳杆菌发酵上清液。活化2代的H.pylori菌悬液调整为108CFU/mL，取100 μL涂布于哥伦比亚血平板，牛津杯中加入150 μL乳杆菌发酵上清液。正置于三气培养箱中培养72 h，测定抑菌圈直径，每个样本做3个平行实验。

1.2.2 乳杆菌抑制H.pylori粘附能力的测定

实验参考PASTENE等[11]的方法。AGS细胞接种于96孔板(2×104个/孔)过夜培养，待细胞贴壁后以感染复数100加入F-12重悬的H.pylori和乳杆菌分别共培养2 h，再加入200 μL尿素酶试剂培养3 h，测定550 nm波长的吸光值，每个样本做6个平行实验。

1.2.3 临床受试者选择标准

招募受试者为通过13C/14C呼气试验(urea breath test，UBT)、快速尿素酶或组织学检查，于入组3个月内诊断为H.pylori感染，且既往未进行抗H.pylori治疗的患者。若患者在纳入研究前的1个月内服用了抗生素或乳杆菌产品、既往有胃肠道手术史、有历史性的严重疾病或者精神疾病将被排除在外。

1.2.4 临床实验设计

本研究于2019年在江苏省盐城市亭湖区人民医院开展，研究通过了伦理审核(编号：ET)，并注册于中国临床试验注册中心(注册号：ChiCTR)。实验招募了26名H.pylori阳性患者，通过随机序列将受试者随机分为2组，即安慰剂和鼠李糖乳杆菌JS-SZ-2-1组。患者每天早晚2次服用菌粉(5×109CFU/g，2 g/包)或安慰剂产品，为期1个月。

1.2.5 临床检测指标

呼气值的测定

受试者在实验开始前1 d和结束后1 d通过14C呼气检测仪测定呼气值。

1.2.5.2 胃肠症状评分的测定

参考SVEDLUND等[12]设计的胃肠症状评分量表(gastrointestinal symptom rating scale，GSRS)，分别于实验开始前1天与结束后1天填写。

1.2.5.3 PG水平的测定

2次体检均收集受试者的血液样品，离心后取血清。具体的测定方法参照ELISA试剂盒进行。

文章来源：《中国疫苗和免疫》网址: http://www.zgymhmy.cn/qikandaodu/2021/0320/881.html