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生物学论文_靶向B细胞的口蹄疫GHloop多肽抗原

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文章摘要:本研究将葡萄球菌A蛋白人工合成类似物的二聚体（DD，a dimer of an Ig-binding fragment D of Staphylococcus aureus protein A）与口蹄疫的GHloop串联，按照大肠杆菌偏好性密码子优化合成GHloop-DD，并评价其免疫原性。将GHloop-DD插入到原核表达载体pET-32a中，鉴定阳性后转入Escherichia coli BL21，进行诱导表达。利用SDS-PAGE与Western blotting对目的基因表达及产物的可溶性进行分析。利用镍亲和层析柱纯化目的蛋白；利用BCA试剂盒测定重组蛋白的浓度，将重组蛋白（2.5 μg/只）与206 佐剂乳化，制备疫苗，免疫5周龄小鼠，同时设商品化合成肽苗对照与空白对照。免疫后28d采集试验小鼠血清，利用口蹄疫病毒多肽ELISA抗体检测试剂盒检测免疫小鼠血清的抗体水平；利用流式细胞仪测定淋巴结B细胞的数量及骨髓中长寿浆细胞的数量；利用荧光定量检测相关趋化因子的表达水平；利用细胞因子检测试剂盒检测脾脏淋巴细胞刺激后上清中的细胞因子的水平。SDS-PAGE结果表明，GHloop-DD基因在大肠杆菌中以可溶形式获得高水平表达；Western blotting结果显示，表达的重组蛋白能够与特异性抗体发生反应。免疫试验结果表明，GHloop-DD不但能够刺激免疫小鼠产生高水平的多肽特异性ELISA抗体，而且能够提高淋巴结B细胞的数目及相关趋化因子水平，使骨髓中长寿浆细胞的数量和脾脏淋巴细胞刺激后上清中细胞因子的水平显著提高。以上结果表明，本研究制备的GHloop-DD具有良好的免疫原性，为口蹄疫多肽疫苗的研制提供了新的方向。

文章关键词:GHloop-DD,体液免疫,B细胞,长寿浆细胞,

项目基金:国家自然科学基金（32002316）资助,

作者单位:2. 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所 4. 南京农业大学动物医学院

论文DOI: 10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20210824.009

论文分类号: S852.4

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文章来源：《中国疫苗和免疫》网址: http://www.zgymhmy.cn/qikandaodu/2021/0826/1892.html