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基础医学论文_汉滩病毒PS-6单克隆抗体的制备及

来源:中国疫苗和免疫 【在线投稿】 栏目:期刊导读 时间:2022-01-25
作者:网站采编
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摘要:文章摘要:目的 制备汉滩病毒(Hantaanvirus,HTNV)PS-6株小鼠单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb),建立HTNV抗原双抗体夹心ELISA检测方法,验证方法的检测性能并初步应用于疫苗抗原含量检测

文章摘要:目的 制备汉滩病毒(Hantaanvirus,HTNV)PS-6株小鼠单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb),建立HTNV抗原双抗体夹心ELISA检测方法,验证方法的检测性能并初步应用于疫苗抗原含量检测。方法 以HTNVPS-6株灭活全病毒原液作为免疫原,采用小鼠杂交瘤融合技术,筛选mAb杂交瘤细胞株,制备mAb;用间接ELISA测定mAb效价;Westernblot鉴定mAb特异性;用间接ELISA测定mAb相对亲和力;经抗体配对筛选,建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法。以I型肾综合征出血热疫苗标准品作为定量标准,验证该方法的检测限、线性范围、特异性、准确度、精密度;对6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行检测,初步验证该方法的适用性。结果 获得4株稳定分泌抗HTNVPS-6特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株:4B2、3H8、5D7及2A7;间接ELISA检测腹水抗体效价均在106~107;Westernblot鉴定4株mAb均能特异性识别HTNVPS-6;相对亲和力为4B2>5D7>3H8>2A7;抗体ELISA配对筛选后,选用5D7作为包被抗体,4B2作为标记抗体,包被抗体工作浓度为10μg/mL,HRP标记抗体工作浓度为1∶5 000。该方法对HTNVPS-6抗原检测限为0.039 1 μg/mL;检测线性范围为0.078 1~2.5000μg/mL,R2>0.97;检测与I型肾综合征出血热疫苗生产主要原辅料成分、II型肾综合征出血热疫苗、森林脑炎疫苗及甲肝疫苗均无交叉反应;准确度验证,病毒抗原回收率在95.8%~110.5%之间;试验内和试验间精密度,变异系数分别在6.72%~8.03%、8.24%~9.70%之间。用该方法检测6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液,结果均呈剂量依赖性。结论 成功制备HTNV PS-6株mAb,建立病毒抗原双抗体夹心ELISA抗原检测方法,方法准确、可靠,可初步应用于I型肾综合征出血热灭活疫苗科研、生产过程病毒抗原检测。

文章关键词:

论文分类号:R392

文章来源:《中国疫苗和免疫》 网址: http://www.zgymhmy.cn/qikandaodu/2022/0125/2380.html



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