表达嵌合蛋白转基因番茄疫苗可通过胃肠道吸收(2) - 中国疫苗和免疫杂志社投稿

来稿应自觉遵守国家有关著作权法律法规，不得侵犯他人版权或其他权利，如果出现问题作者文责自负，而且本刊将依法追究侵权行为给本刊造成的损失责任。本刊对录用稿有修改、删节权。经本刊通知进行修改的稿件或被采用的稿件，作者必须保证本刊的独立发表权。一、投稿方式： 1、请从我刊官网直接投稿。 2、请从我编辑部编辑的推广链接进入我刊投审稿系统进行投稿。二、稿件著作权： 1、投稿人保证其向我刊所投之作品是其本人或与他人合作创作之成果，或对所投作品拥有合法的著作权，无第三人对其作品提出可成立之权利主张。 2、投稿人保证向我刊所投之稿件，尚未在任何媒体上发表。 3、投稿人保证其作品不含有违反宪法、法律及损害社会公共利益之内容。 4、投稿人向我刊所投之作品不得同时向第三方投送，即不允许一稿多投。 5、投稿人授予我刊享有作品专有使用权的方式包括但不限于：通过网络向公众传播、复制、摘编、表演、播放、展览、发行、摄制电影、电视、录像制品、录制录音制品、制作数字化制品、改编、翻译、注释、编辑，以及出版、许可其他媒体、网站及单位转载、摘编、播放、录制、翻译、注释、编辑、改编、摄制。 6、第5条所述之网络是指通过我刊官网。 7、投稿人委托我刊声明，未经我方许可，任何网站、媒体、组织不得转载、摘编其作品。

表达嵌合蛋白转基因番茄疫苗可通过胃肠道吸收(2)

作者:

关键词:

摘要：

1.4.5 免疫及取材鼠龄29 d灌胃免疫大鼠，1次/周，灌胃量100 μL/g。阳性对照组：灌胃灭活变异链球菌疫苗约2 mL；实验组：灌胃表达PAcA/CTB转基因番茄疫苗约2 mL；阴性对照组：灌胃普通番茄约2 mL；1次/周，连续4周。免疫前及免疫1，2，3，4周取血、唾液(共5次)，高速离心后 -80 ℃ 冰箱保存备用。鼠龄57 d时，麻醉处死大鼠，取上下颌骨标本。

1.4.6 酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血清及唾液中IgG、sIgA抗体水平微量酶标板中每孔加入10 mg/L PAc蛋白稀释液，4 ℃包被过夜。第2天用体积分数3%牛血清白蛋白封闭反应孔2h，洗板后加入稀释好的待测标本温育2 h。洗板后分别加入辣根过氧化物酶标记羊抗大鼠IgG、IgA (1∶1 000)温育2 h。加入终止液终止反应后测定A450值。

1.4.7 大鼠龋齿记分分离SD大鼠上、下颌骨并去净软组织。用金刚砂片(厚度0.1 mm，直径25 mm)沿近远中向矢状片切上、下磨牙颌面。浸泡于0.4%的紫尿酸胺染液中12 h后清洗干燥，置于体视显微镜下，几乎不着色或着色很浅的部位为正常牙体组织，呈现淡粉红色为龋损部位，依据Keyes 评分方法记分进行评估。镜下按龋损着色程度及累及深度可分为4级：E级：仅限牙釉质；Ds级：牙釉质及牙本质外层1/4以内；Dm级：牙本质厚度的1/4至3/4；Dx级：牙本质厚度的3/4或牙本质全层。

1.5 主要观察指标 ①转基因番茄中目的蛋白含量；②唾液中sIgA型抗PAcA抗体水平；③血液中IgG型抗PAcA抗体水平；④大鼠磨牙龋齿Keyes评分。

1.6 统计学分析多组之间的比较采用单因素方差分析，两组之间比较根据方差齐性用LSD检验或 Tamhane检验。龋齿计分的各组实验结果采用对等级数据进行Mann-WhitneyU非参数检验。P＜ 0.05认为差异有显著性意义。

2 结果 Results

2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠18只，分为3组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。

2.2 转基因番茄中目的蛋白含量的检测用PAc标准蛋白浓度梯度测波长为490 nm时的A值，根据线性方程：Y=0.006 0X+0.052 9绘出PAc标准蛋白曲线。转基因番茄蛋白样本A值为0.077 6，对应目的蛋白质量浓度为4.12 mg/L。

2.3 唾液中sIgA型抗PAcA抗体水平的观察随时间变化各组小鼠唾液中sIgA型抗PAcA抗体水平见表2；组间比较结果见表3。阳性对照组、实验组分别与阴性对照组比较，第1，2，3，4周小鼠唾液中sIgA型抗PAcA抗体水平均显著升高 (P＜ 0.01)。

表2 ｜随时间变化各组小鼠唾液中sIgA型抗PAcA抗体水平 (±s，n=6，A450)Table 2 ｜Antibody levels of anti-PAcA sIgA in rat salivary at different time表注：免疫后多组比较方差分析P＜ 0.01周数分组阳性对照组实验组阴性对照组0 0. 0. 0. 1 0. 0. 0. 2 0. 0. 0. 3 0. 0. 0. 4 0. 0. 0.

2.4 血液中IgG型抗PAcA抗体水平的观察随时间变化各组小鼠血液中IgG型抗PAcA抗体水平见表4；组间比较结果见表5。阳性对照组与阴性对照组比较，免疫后第1，2，3，4周小鼠血液中IgG型抗PAcA抗体水平显著升高(P＜ 0.01)。实验组与阴性对照组比较，免疫后1周抗PAcA抗体上升较快，但差异无显著性意义(P＞ 0.05)；第2-4周差异均有显著性意义(P＜ 0.05，P＜ 0.01)。

表3 ｜大鼠各组sIgA型抗PAcA抗体A450值组间比较P值Table 3 ｜Comparison ofA450values of anti-PAcA sIgA among groups (Pvalue)组间比较周数0 1 2 3 4阳性对照组与实验组 0.711 0.214 0.039 0.267 0.006阳性对照组与阴性对照组 0.894 0.000 0.000 0.000 0.000实验组与阴性对照组 0.811 0.002 0.004 0.003 0.001

表4 ｜随时间变化各组大鼠血液中IgG型抗PAcA抗体水平 (±s，n=6，A450)Table 4 ｜Antibody levels of anti-PAcA IgG in rat serum at different time表注：免疫后多组比较方差分析P＜ 0.01周数分组阳性对照组实验组阴性对照组0 0. 0. 0. 1 0. 0. 0. 2 0. 0. 0. 3 0. 0. 0. 4 0. 0. 0.

表5 ｜大鼠各组血液中IgG型抗PAcA抗体A450值组间比较P值Table 5 ｜Comparison ofA450values of anti-PAcA IgG among groups (Pvalue)组间比较周数0 1 2 3 4阳性对照组与实验组 0.522 0.024 0.011 0.176 0.000阳性对照组与阴性对照组 0.732 0.001 0.000 0.000 0.000实验组与阴性对照组 0.764 0.085 0.016 0.001 0.000

2.5 大鼠磨牙龋齿Keyes评分从表6中可以看出阳性对照组牙齿的损坏程度最小，少数达牙本质浅层，龋齿数量最少；其次是实验组，少数达牙本质深层，龋坏数量增加；阴性对照组损坏最为严重，多达牙本质深层，龋损数量最多。两两比较结果显示：阳性对照组与阴性对照组比较，E级龋损(图1A)、DS(图1B)、DM(图1C)级龋损，均差异有非常显著性意义(P＜ 0.01)，DX级龋损(图1D) 差异有显著性意义(P＜ 0.05)；实验组与阴性对照组比较各级龋损均差异有显著性意义(P＜ 0.05)，见表7。

文章来源：《中国疫苗和免疫》网址: http://www.zgymhmy.cn/qikandaodu/2021/0223/646.html